Nucleotide sequences that encode the pVP2 proteins from a variant infectious bursal disease virus (IBDV) strain designated USA08MD34p and a classic IBDV strain designated Mo195 were produced with the use of reverse-transcriptase–polymerase chain reaction (RT-PCR) and cloned into a pGEM-T Easy vector. A nucleotide sequence that encodes the VP3 protein was also produced from the USA08MD34p viral genome with the use of RT-PCR and cloned into a pGEM-T Easy vector. The VP3 and pVP2 clones were inserted into the pVL1393 baculovirus transfer vector and sequenced to confirm their orientation to the promoter and to ensure they contained uninterrupted open reading frames. Recombinant baculoviruses were constructed by transfection in Sf9 cells. Three recombinant baculoviruses were produced and contained the USA08MD34p-VP3, USA08MD34p-pVP2, or Mo195-pVP2 genomic sequences. Virus-like particles (VLPs) were observed with the use of transmission electron microscopy when the USA08MD34p-VP3 baculovirus was co-inoculated into Sf9 cells with either of the pVP2 constructs. VLPs were also observed when the USA08MD34p-pVP2 and Mo195-pVP2 were coexpressed with USA08MD34p-VP3. These multivalent VLPs contained both classic and variant pVP2 molecules. Stability tests demonstrated the VLPs were stable at 4 and 24 C for 8 wk. The USA08MD34p, Mo195, and multivalent VLPs were used to vaccinate chickens. They induced an IBDV-specific antibody response that was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and virus-neutralizing antibodies were detected in vitro. Chickens vaccinated with the multivalent VLPs were protected from a virulent variant IBDV strain (V1) and a virulent classic IBDV strain (STC). The results indicate the multivalent VLPs maintained the antigenic integrity of the variant and classic viruses and have the potential to serve as a multivalent vaccine for use in breeder-flock vaccination programs.

Protección conferida por una vacuna multivalente elaborada con partículas similares a virus contra cepas clásicas y variantes de la enfermedad infecciosa de la bolsa.

Las secuencias de nucleótidos que codifican las proteínas pVP2 de una cepa variante de virus de la enfermedad infecciosa bursal (IBDV) designada USA08MD34p y una cepa clásica designada Mo195 fueron producidas mediante transcripción reversa y reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) y se clonaron en el vector pGEM -T Easy vector. También se produjo una secuencia de nucleótidos que codificaba para la proteína VP3 a partir del genoma viral de la cepa USA08MD34p mediante RT-PCR y se clonó en el vector pGEM-T Easy. Los clones VP3 y pVP2 fueron insertados en el vector de transferencia baculovirus pVL1393 y fueron secuenciados para confirmar su orientación con el promotor y para asegurar que contenía marcos de lectura continua ininterrumpidos. Los baculovirus recombinantes fueron construidos por la transfección en células Sf9. Se produjeron tres baculovirus y contenían las secuencias genómicas USA08MD34p-VP3, USA08MD34p-pVP2, o Mo195-pVP2. Con el uso de microscopía electrónica de transmisión se observaron virus semejantes a partículas cuando el baculovirus USA08MD34p-VP3 fue co-inoculado en células Sf9 con cualquiera de los constructos de pVP2. También se observaron partículas semejantes a virus cuando los vectores USA08MD34p-pVP2 y Mo195-pVP2-se fueron co-expresados con el vector USA08MD34p-VP3. Estas partículas semejantes a virus polivalentes contenían moléculas de pVP2 tanto clásicas como variantes. Las pruebas de estabilidad demostraron que las partículas semejantes a virus eran estables entre 4 y 24 C, durante 8 semanas. Los vectores USA08MD34p, Mo195 y las moléculas semejantes a virus polivalentes se utilizaron para vacunar pollos. Se indujo una respuesta de anticuerpos específico contra el virus de Gumboro que fue detectada por el ensayo de inmunoabsorción con enzimas ligadas (ELISA), y se detectaron a